李果实高质量RNA提取方法的比较和优化

• 作者: 张京声 朱本忠 罗云波 邵毅 陈安均
• 来源期刊: 北京林业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: RNA提取 高氯酸盐 李果实 多酚 多糖
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 林学
• 页码范围: 57-62
• 页数: 6页
• 分类号: S662.3|Q781
• 语种: 中文

摘要

李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75 mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究.比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好.根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1 mol/L Tris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3 mol/L Tris-HC1缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中口一巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12 000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等.在230、260和280 nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗云波	中国农业大学食品科学与营养工程学院	257	3241	29.0	44.0
2	朱本忠	中国农业大学食品科学与营养工程学院	73	593	14.0	20.0
3	张京声	中国农业大学食品科学与营养工程学院	21	131	7.0	11.0
4	邵毅	中国农业大学食品科学与营养工程学院	3	59	2.0	3.0
5	陈安均	中国农业大学食品科学与营养工程学院	4	76	3.0	4.0