同时扩增与收获脐带血来源造血干细胞及间充质干细胞的研究

• 作者: 刘天庆 宋克东 崔占峰 殷轶群 范秀波 郝永杰 马学虎
• 来源期刊: 高校化学工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脐带血 造血干细胞 间充质肝细胞 生物反应器 扩增 收获
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 808-818
• 分类号: Q813.11
• 字数: 6217字
• 语种: 中文

摘要

目的为利用生物反应器,实现脐带血(Umbilical cord blood,UCB)来源的造血干细胞(Hematopoiefic stem cells,HSCs)与间充质干细胞(Mcsenchymal stem cells,MSCs)的同时扩增与收获.方法为在不添加血清、只添加细胞因子组合(SCF 15 ng·mL-1,FL 5 ng·mL-1,TPO 6 ng·mL-1,IL-3 15 ng·mL-1,G-CSF 1 ng·mL-1,GM-CSF 5 ng·mL-1)及海藻酸钙壳聚糖胶珠包被基质细胞支持的条件下,采用玻璃包被的聚苯乙烯(Glass coated styrene copolymer,GCSC)微载体与生物反应器相结合的策略,考察了UCB-HSCs与UCB-MSCs在转瓶及旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel bioreactor,RWVB)内的共培养.结果 RWVB中的扩增效果最佳,12天内有核细胞(Nuclear cells,NCs)扩增了3.7+0_3倍;集落形成细胞(Colony-formingunitsinculture,CFU-Cs)扩增了5.1±1.2倍;CD34+CD45+CDl05-(HSCs)细胞扩增了5.2±0.4倍;CD34-CD45-CD105+(MSCs)细胞扩增了13.9±1.2倍.培养结束后,通过自由沉降的方法分离UCB-HSCs和粘附在GCSC微载体表面的UCB-MSCs.同时,细胞多向诱导分化及免疫表型分析结果显示,粘附在GCSC微载体表面上的细胞能够向骨、软骨及脂肪细胞分化;并能够表达间质细胞相关表面标志CD13,CD44,CD73和CD105,而不表达造血细胞的相关表面标志CD34,CIM5及HLA-DR,与骨髓MSCs相一致.结论为添加细胞因子、基质细胞及微载体支持的条件下,在生物反应器内能够实现UCB-HSCs和UCB-MSCs的同时扩增与收获.