含AFP基因调控序列的pAFP-P53-EGFP质粒诱导AFP阳性肝癌细胞凋亡

• 作者: 刘健敏 刘福英 尤红煜 张焕铃 王俊霞 连伟光 郑龙
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AFP基因 肝癌细胞 表达调控 P53 细胞周期阻滞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 297-301
• 分类号: R730.54|R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.03.010

摘要

目的:观察含AFP基因调控序列的载体对AFP阳性肝癌细胞的靶向致凋亡作用.方法:将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2 kb的AFP基因调控序列,构建pAFP-EGFP载体,分别转染人肝癌HepG2(AFP阳性)、人肝癌SMMC7721(AFP阴性)和人宫颈癌HeLa(AFP阴性)细胞,荧光显微镜下观察EGFP荧光蛋白表达强度.引入P53基因片段,构建pAFP-P53-EGFP重组质粒,转染HepG2、SMMC7721和HeLa细胞,Western blotting检测各组细胞P53蛋白的表达,流式细胞术分析各组细胞凋亡率及细胞周期.结果:成功构建了pAFP-EGFP和pAFP-P53-EGFP重组质粒.pAFP-EGFP转染后,AFP阳性的HepG2细胞中EGFP荧光蛋白表达显著高于AFP阴性的SMMC7721和HeLa细胞.pAFP-P53-EGFP转染后,HepG2细胞中P53蛋白的表达量明显高于SMMC7721和HeLa细胞;HepG2细胞的G1期细胞及细胞凋亡率明显高于SMMC7721和HeLa细胞[(66.7±0.25)%vs(50.5±0.18)%,(51.0±0.20)%,P＜0.05;(2.65±0.08)%vs(0.42±0.03)%,(0.39±0.02)%,P＜0.05],但S期细胞明显低于转染后SMMC7721和HeLa细胞[(20.1±0.22)%vs(29.8±0.18)%,(37.8±0.21)%,P＜0.05].结论:含AFP基因调控序列的pAFP-P53-EGFP载体可专一性地作用于AFP阳性肝癌细胞,引起肝癌细胞周期阻滞和凋亡.