Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化

• 作者: 李云霞 韩斌 马晖玲
• 来源期刊: 草地学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苜蓿 溶菌酶Lyz基因 绿色荧光蛋白GFP基因 愈伤组织 农杆菌介导
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 352-357
• 分类号: Q786|Q814.9
• 字数: 5427字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11733/j.issn.1007-0435.2010.03.008

摘要

利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农1号"杂花苜蓿(Medicago sativa Martyn)和"甘农3号"紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术,检测到溶菌酶Lyz和绿色荧光蛋白GFP基因在苜蓿愈伤细胞中的表达;研究该双元基因在苜蓿品种"甘农1号"和"甘农3号"中转化的若干影响因素,确定适宜的转化条件以期提高基因转化效率.结果表明:75 mg·L-1的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长具有显著抑制效应;300 mg·L-1头孢霉素能够有效地抑制农杆菌LBA4404的生长;OD600值为0.4～0.5的农杆菌适宜的侵染时间是10 min;经预培养3～4 d的材料侵染后再共培养3 d之后,在愈伤组织诱导培养基MS+2,4-D 2.0 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+0.6%琼脂+2.5%蔗糖的培养基上诱导出抗性愈伤组织;"甘农1号"和"甘农3号"的抗性愈伤组织诱导率分别为35%和32%.