原代大鼠肾小球系膜细胞最佳电转染条件的探索和验证

• 作者: 吕杨 崔文鹏 徐锋 李晓帆 苗里宁 谢院生 陈香美
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 转染 电穿孔 肾小球系膜细胞
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 459-461,482
• 分类号: R329.27
• 字数: 3632字
• 语种: 中文

摘要

目的 探索并验证原代大鼠肾小球系膜细胞最佳电转染条件.方法 设立不同的电压与电容组合、电击前孵育温度、质粒DNA浓度等电转染条件,将绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1导入原代大鼠肾小球系膜细胞.24h后比较各组细胞存活率和绿色荧光蛋白表达情况,确立最佳电转染条件.再以此条件电转染质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1-FHL2,48h后收取两组细胞RNA和蛋白.应用RT-PCR和Western印迹检测目的 基因FHL2的核酸和蛋白表达,验证电转染效果.结果 在电击前室温孵育,40μg质粒,340V电压、550μF电容的最佳电转染条件下,原代大鼠肾小球系膜细胞的电转染效率可达40%以上,细胞存活率在50%左右.转染FHL2质粒组较对照组检测FHL2的核酸和蛋白表达水平明显升高(P<0.05).结论 适当的电转染条件可以有效转染原代大鼠肾小球系膜细胞.