山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化

• 作者: 刘平 卢克焕 卢晟盛 杨照海 毕方方 赵华 郑喜邦
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 c-Myc基因 分子克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 931-937
• 分类号: S8
• 字数: 5177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.05.016

摘要

本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊GST-Sox2融合蛋白.用RT-PCR方法从山羊(Capra hircus)肠组织克隆了c-Myc基因,通过TA克隆,构建了pMD18-T-Myc质粒.DNA测序证明,山羊c-Myc全长cDNA约1320 bp,该序列包含一个完整的开放阅读框,编码439个氨基酸,经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的c-Myc序列同源性为99.2%.将该cDNA片段亚克隆至pGEX-KG载体,构建了重组质粒pGEX-KG-Myc.经酶切鉴定和测序,将重组质粒导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,由IPTG诱导表达,以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化GST-Myc融合蛋白.SDS-PAGE分析表明,纯化的GST-Myc融合蛋白约75 kD,与预期值相符,且呈现清晰的单一条带.Western blot检测证实,该融合蛋白能够被GST抗体所识别.本实验克隆了山羊c-Myc基因,获得了高纯度的GST-Myc融合蛋白,为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料,为山羊iPS细胞(induced pluripotent stem cells)检测创造了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨照海	广西大学动物科技学院	4	29	3.0	4.0
2	卢克焕	广西大学动物科技学院	92	660	15.0	20.0
3	郑喜邦	广西大学动物科技学院	22	91	6.0	8.0
4	卢晟盛	广西大学动物科技学院	73	415	12.0	16.0
5	刘平	广西大学动物科技学院	17	96	6.0	9.0
6	毕方方	广西大学动物科技学院	12	28	2.0	5.0
7	赵华	广西大学动物科技学院	4	21	2.0	4.0