山羊c-Myc原癌基因原核表达和多克隆抗体的制备

• 作者: 刘平 卢克焕 卢晟盛 张昀 张明 李恭贺 王丽霞 辛桂瑜 郑喜邦 韦友传
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 c-Myc基因 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 867-871
• 分类号: S827|Q786
• 字数: 3924字
• 语种: 中文

摘要

c-Myc原癌基因与胚胎干细胞(ES细胞)和诱导的多能性干细胞(iPS细胞)生物学特性密切相关,因此制备其相应的多克隆抗体尤为必要.本研究以pMD18T-Myc质粒为模版,PCR扩增c-Myc片段,然后将其亚克隆到pSE380表达载体上,获得pSE380-Myc重组质粒.该质粒转化工程菌BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Myc融合蛋白,随后用SDS-PAGE电泳及Western blot加以验证.在变性条件下用Ni-NTA argrose介质分离纯化His-Myc融合蛋白,并以此为抗原免疫新西兰大白兔.经过4次免疫,采集血液、分离血清,用Western blot检测抗体特异性.结果表明:(1)pSE380-Myc重组质粒在工程菌BL21( DE3)得到了高效表达；(2)得到了高纯度高含量的His-Myc融合蛋白；(3)经Wstern blot检测发现,c-Myc多克隆抗体与His-Myc融合蛋白能够特异性结合.本研究获得的特异性山羊c-Myc多克隆抗体,为进一步研究山羊ES细胞和iPS细胞的自我更新机制奠定了基础.