短发夹状干扰RNA沉默信号传导和转录激活子3基因表达对大肠癌细胞的影响

• 作者: 乔志明 夏春林 管文贤 钱伟峰 高源 黄兴锐
• 来源期刊: 苏州大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 shRNA STAT3 大肠癌
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 252-256
• 分类号: R318.14
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带信号传导和转录激活子3(STAT3)基因短发夹状干扰RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰STAT3表达对大肠癌细胞HT-29细胞增殖的影响.方法 从GenBank STAT3 mRNA上寻找到3条符合特征的靶序列,合成靶序列的DNA寡核苷酸链,合成双链DNA,并和BamH Ⅰ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒连接产生重组质粒,行PCR和测序鉴定.重组质粒瞬时转染大肠癌HT-29细胞,实时定量PCR、Western blot检测STAT3的表达.筛选出最佳重组质粒,转染大肠癌细胞后,MTY检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 成功构建了携带有STAT3基因的shRNA的重组质粒,PCR和测序证实重组质粒构建正确.3种重组质粒对大肠癌HT-29细胞STAT3的表达有明显的抑制作用.筛选出的最佳重组质粒转染大肠癌细胞后,细胞增殖能力明显减弱;细胞周期分析显示,Go/G1期细胞占(74.80±1.85)%,S期细胞占(15.72±2.26)%,与对照组差异显著(P<0.01).结论 干扰STAT3基因的表达可以有效抑制大肠癌HT-29细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏春林	苏州大学医学部解剖学系暨细胞神经生物学研究室	100	500	10.0	18.0
2	黄兴锐	苏州大学医学部解剖学系暨细胞神经生物学研究室	4	9	2.0	3.0
3	钱伟峰	苏州市立医院本部普外科	3	5	2.0	2.0
7	管文贤	苏州市立医院本部普外科	3	5	2.0	2.0
8	高源	苏州市立医院本部普外科	4	9	2.0	3.0
9	乔志明	苏州市立医院本部普外科	4	5	2.0	2.0