基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建

• 作者: 卜萌萌 朱宁 郭倩 郭思超 闫雪静 陈倩 陈梅红
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 微小RNA 短发夹RNA 随机文库
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 518-524
• 页数: 7页
• 分类号: Q74
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2017.04.010

摘要

目的 构建高效发夹状随机短发夹RNA (shRNA)文库.方法 构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率.在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA (miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果.基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库.结果 由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录.基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率.构建了一个容量为1.8×107的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库.结论 构建了一个大容量的新型随机shRNA文库.