靶向狂犬病病毒N基因shRNA抑制狂犬病病毒复制的研究

• 作者: 夏咸柱 崔燕 杨松涛 杨瑞梅 王承宇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 shRNA RNA干扰 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 315-321
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 5548字
• 语种: 中文

摘要

为探讨小干扰RNA(siRNA)对狂犬病病毒(RV)复制的干扰作用,以RV N基因为靶向目标,设计合成4对编码siRNA的DNA序列,然后分别连接到载体pRNATU6. 3-Hygro上,转染BHK细胞,在潮霉素-B抗性压力下筛选出4个阳性细胞株(BHK-N1、BHK-N2、BHK-N3和BHK-N4).用100TCID_(50) CVS-11毒分别感染24孔板内的上述细胞,利用Real-time RT-PCR、半数细胞培养物感染量(TCID_(50))、直接免疫荧光和Western blot检测抑制效率.接毒后48 h,在BHK-N1、BHK-N2、BHK-N3、BHK-N4细胞株中,Real-time RT-PCR检测到各细胞株均在不同程度上抑制了RV的增殖,其中BHK-N2、BHK-N1抑制效率高,分别为99%、67. 72%,而BHK-N3、BHK-N4仅为38. 59%和11. 33%,抑制效果较弱;TCID_(50)检测病毒数量比空载体表达细胞毒价分别低24、96.2、2.14和1.1倍;直接免疫荧光检测表明,4株细胞中RV含量为病毒对照的31%、1%、54%、82%,即BHK-N1、BHK-N2对病毒的沉默作用较强;Western blot结果显示BHK-N1、BHK-N2细胞株中RV N蛋白条带明显减弱.4种检测结果均表明BHK-N1和BHK-N2能有效干扰RV的复制.本研究在细胞水平筛选出具有高效抑制RV复制的2个靶位点N-489和N-701,为RV的基因功能研究、抗病毒药物的开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨松涛	军事医学科学院军事兽医研究所	49	267	9.0	13.0
2	夏咸柱	军事医学科学院军事兽医研究所	61	402	11.0	15.0
3	崔燕	甘肃农业大学动物医学院	119	412	10.0	13.0
4	王承宇	军事医学科学院军事兽医研究所	10	45	4.0	6.0
5	杨瑞梅	甘肃农业大学动物医学院	26	85	6.0	8.0