四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立

• 作者: 刘志玲 刘志辉 吴晓薇 周科 曾碧健 林志雄 毕英佐 陈茹 马静云
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 变性高效液相色谱 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 禽分枝杆菌 副结核分枝杆菌 多重PCR
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 41-45,52
• 页数: 6页
• 分类号: R535
• 字数: 4432字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.01.011

摘要

目的 运用多重核酸扩增(PCR)联合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌.方法 根据四种分枝杆菌特异基因序列分别设计菌种特异核酸扩增引物,通过筛选优化试验建立四重核酸扩增体系,对核酸扩增产物采用DHPLC设备进行检测分析,每一菌种的核酸扩增产物分别形成DHPLC特征峰图.对结核分枝杆菌等51株分枝杆菌标准株和分离株样品以及沙门氏菌等22株常见微生物样品进行特异性检测试验;对四种分枝杆菌特异的核酸扩增产物分别制备克隆质粒,通过对梯度稀释的阳性质粒的检测试验,进行多重PCR-DHPLC灵敏度测试;对疑似病人痰液样品和疑似发病牛的组织样品进行检测,并与细菌分离培养法进行比较以验证临床检测效果. 结果该方法能快速检测鉴别上述四种分枝杆菌,检测灵敏度达到10~2～10~3基因拷贝,从131份疑似病人临床样品中检出91份结核分枝杆菌阳性,从40份来自疑似发病牛群的临床样品中检出31份牛分枝杆菌阳性,检出率均高于细菌分离培养法.结论 研究表明所建立的多重PCR-DHPLC方法能快速检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌,为人畜结核、副结核病诊断提供一种新型分子生物学技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕英佐		216	2631	28.0	41.0
2	林志雄		35	164	8.0	10.0
3	马静云		87	548	13.0	19.0
4	刘志辉		98	522	10.0	19.0
5	陈茹		25	163	8.0	11.0
6	刘志玲		4	21	3.0	4.0
7	曾碧健		9	63	5.0	7.0
8	吴晓薇		11	52	3.0	7.0
9	周科		3	19	3.0	3.0