重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 牟群 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 牛分枝杆菌 CFP-10蛋白 间接ELISA 阴阳临界值
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1291-1295
• 页数: 5页
• 分类号: S854.43
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.7.1291

摘要

[目的]建立检测牛分枝杆菌的间接ELISA方法,快速区分致病性与非致病性牛分枝杆菌,为净化牛结核病提供技术支撑.[方法]以体外扩增表达并纯化的重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白为包被抗原,建立检测牛分枝杆菌的间接ELISA,并应用方阵法优化间接ELISA的检测条件.[结果]重组CFP-10蛋白间接ELISA的最佳检测条件为:以8μg/mL重组CFP-10蛋白包为被抗原,37℃下包被1h,再以5％脱脂奶封闭1h,血清(一抗)经1∶200倍稀释后作用1h,然后以1:500倍稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(二抗)作用1h.该间接ELISA的阴阳临界值为0.281,仅与牛分枝杆菌呈阳性反应,与牛布鲁氏杆菌、牛口蹄疫病毒无交叉反应;其敏感性能检测1:320倍稀释的血清,批内与批间的变异系数均小于5.0％.[结论]建立的重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA具有特异、敏感等优点,临床上可用于致病性牛分枝杆菌的检测.