牛分枝杆菌ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中的融合表达

• 作者: 刘付启荣 崔敏 张欣 房红莹 罗满林 蒋启荣 陈钜豪 马魁
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛分枝杆菌 ESAT-6基因 CFP-10基因 融合表达
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 504-509
• 页数: 6页
• 分类号: S855.12
• 字数: 5549字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.06.011

摘要

以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得了ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6基因和CFP-10基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到了融合基因.将融合基因片段先克隆于pMDl8-T载体,再亚克隆到表达载体pET32a(+)中,通过限制性内切酶消化、菌液PCR鉴定、序列分析证实得到含预期序列的重组质粒pET-ESAT-6-CFP-10;该质粒转化BL21(DE3);经IPTG诱导,表达出了40 ku的融合蛋白;用Ni螯合层析方法纯化该蛋白,经SDS-PAGE检测,出现了清晰的单一条带;Western-blotting试验结果显示,该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应.结果表明,ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中融合表达成功并具有良好的反应原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	房红莹	华南农业大学兽医学院	19	63	5.0	7.0
3	罗满林	华南农业大学兽医学院	111	453	11.0	14.0
4	崔敏	福建农林大学动物科学学院	7	23	4.0	4.0
5	张欣	华南农业大学兽医学院	11	31	4.0	4.0
6	蒋启荣		16	57	3.0	7.0
9	陈钜豪	华南农业大学兽医学院	5	14	2.0	3.0
10	马魁	华南农业大学兽医学院	3	10	2.0	3.0
11	刘付启荣		1	6	1.0	1.0