人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达

• 作者: 师文娟 王恒 邵丁丁 钟翔
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: CD74 杆状病毒 昆虫细胞 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 598-602
• 分类号: R382.3
• 字数: 2864字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立应用昆虫杆状病毒表达系统表达人Ⅱ型CD74胞外端片段的技术平台.方法 运用分子克隆技术,分别将CD 74胞外端全长(73～232aa)和与MIF结合的核心区(109～192aa)片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下,重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组,提取重组病毒杆粒基因组,转染Sf-21细胞系.用RT-PCR检测目的 基因mRNA,用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达.结果 CD74胞外端全长(73～232 aa)可实现在昆虫细胞中的表达,目的 蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别;在细胞感染72 h、病毒接种滴度MOI为8时,目的 蛋白可实现最大表达量.CD74与MIF结合的核心区(109～192 aa)片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的 蛋白表达.结论 成功建立人Ⅱ型CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台,并获得了目的 蛋白表达的优化条件.