人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段的克隆及原核表达

• 作者: 余细勇 单志新 林秋雄 符永恒
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CD74 人巨噬细胞移动抑制因子 克隆,分子 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（z1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 35-37
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2005.z1.015

摘要

[目的]扩增、克隆人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.[方法]根据人CD74基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术,从人Raji B细胞中扩增CD74基因片段.将CD74基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达载体pGEX-4T-CD74,并转化工程菌BL21(DE3).用IPTG诱导BL21(DE3)中导入的CD74基因的表达,并行SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.用GSTrap亲合柱纯化重组CD74蛋白,通过体外血管生成实验鉴定重组CD74蛋白对巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的阻断作用.[结果]扩增出人CD74基因片段,并成功构建了重组质粒pGEX-4T-CD74.测序结果显示,克隆的CD74 cDNA长480 bp,序列与文献报道一致.经IPTG诱导,特异表达出可溶性的44 KDa的重组蛋白,其可被人CD74抗体识别.体外血管生成实验结果显示,重组CD74蛋白能特异地阻断MIF的促血管生成作用.[结论]克隆了人CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余细勇	广东省人民医院医学研究中心	72	355	9.0	15.0
2	单志新	广东省人民医院医学研究中心	38	157	7.0	11.0
3	林秋雄	广东省人民医院医学研究中心	66	489	13.0	17.0
4	符永恒	广东省人民医院医学研究中心	22	106	5.0	9.0