锚定多重PCR技术的建立及其在核酸相对分子质量标准制备中的应用

• 作者: 严瑞芬 刘虎岐 吴永红 屈武斌 张成岗
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 锚定 多重PCR 核酸扩增技术 相对分子质量标准 大肠杆菌 敏感性与特异性
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 516-518,522
• 分类号: Q503
• 字数: 2986字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.06.005

摘要

目的 利用5'端锚定引物及多重聚合酶链反应(PCR)技术建立高效、特异性扩增核酸片段的方法,并探讨其在核酸相对分子质量(Mr)标准(DNA标志物)制备中的应用.方法 针对常用的pMD19-T载体(2692 bp)序列,利用命令行程序pd4marker.py,结合Primer3及多因素引物特异性评估软件MFEprimer,设计5'端锚定的上游引物和7对扩增不同目的 片段的下游引物;其次,以转化有pMD19-T载体的大肠杆菌DH5α菌液为模板,分别进行一至七重PCR扩增;并将扩增产物经2%琼脂糖凝胶分离及凝胶成像仪采集图像分析;最后,评估该方法在核酸Mr标准制备中的应用.结果 制备了特异性较好的一至七重PCR扩增产物,可针对不同实验目的 进行不同核酸Mr标准的制备.结论 建立了一种快速、特异性扩增核酸片段的锚定多重PCR方法,可根据不同实验目的 ,快速制备出不同Mr标准大小的核酸片段,进一步拓展了PCR技术的应用范围.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘虎岐	西北农林科技大学生命科学学院	28	98	5.0	8.0
2	吴永红	军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室	12	102	5.0	10.0
3	屈武斌	军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室	8	24	3.0	4.0
4	严瑞芬	西北农林科技大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0