副猪嗜血杆菌部分体内诱导基因的筛选

• 作者: 唐彬川 张芯铨 文心田 曹三杰 王国镔 都启晶 黄小波
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 基因组表达文库 体内抗原诱导鉴定技术 菌落原位免疫杂交
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 673-679
• 页数: 7页
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文

摘要

用Sau3A I酶切副猪嗜血杆菌(HPS)SC-1株基因组,回收500～2000 bp的片段,并与pRSETa/b/c载体连接,构建了HPS SC-1株基因组表达文库;将攻毒后不同时间的猪血清混合,分别与体外培养的HPS Sel和大肠杆菌BL21的全菌、超声裂解产物及热变性裂解产物进行吸附,用ELISA检测吸附效果,并用Western-blot进一步验证;再用经过吸附的混合血清对HPS SC-1基因组表达文库进行菌落原位免疫杂交筛选;对筛选出来的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果显示,构建的副猪嗜血杆菌基因组文库库容量为1.2×104CFU;混合血清经过吸附后,D450mm由0.384下降到0.220.Western-blot结果显示,经吸附的血清与HPS SC-1株超声裂解产物无任何条带;通过原位免疫印迹筛选获得5个阳性克隆;阳性克隆测序结果经DNAMAN分析初步推测出5个可能具有生物学意义的开放阅读框,BLAST分析表明,这些序列与GenBank中的副猪嗜血杆菌相应基因的同源性在99%以上,分别涉及副猪嗜血杆菌的酪氨酸磷酸酯酶、异亮氨酰-tRNA合成酶、荚膜多糖输出蛋白及2个假定蛋白.结果表明,应用体内诱导抗原技术从副猪嗜血杆菌SC-1株基因组表达文库中成功筛选出5个阳性克隆,其中部分基因可能与毒力相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文心田		100	612	14.0	19.0
2	曹三杰		89	524	12.0	17.0
3	黄小波		52	188	9.0	11.0
4	都启晶		5	19	3.0	4.0
5	王国镔		1	0	0.0	0.0
6	唐彬川		1	0	0.0	0.0
7	张芯铨		1	0	0.0	0.0