人成纤维细胞生长因子21基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 万晓珊 孔祥鑫 李校堃 杨苹 王会岩 赵宏鑫 邵明龙
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人成纤维生长因子21 毕赤酵母 pPIC9K 基因克隆
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 644-650,封2
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础.方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物.利用融合PCR方法获得人工合成的成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因,定向克隆到质粒pPIC9K中,电转化Pichia pastoris GS115和SMD1168.MD、MM平板筛选表型Mut+,YPD/G418平板进一步筛选高拷贝转化子.甲醇诱导表达,硫酸铵沉淀、分子筛、离子交换方法纯化目的蛋白.结果:PCR 扩增出约569 bp的特异性片段,测序分析正确;诱导表达上清经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:FGF21在宿主菌GS115中不表达,而在SMD1168表达上清中出现相对分子质量为20 000的特异性条带,且与抗FGF21抗体产生特异性反应,阴性对照在该处无特异性带,证明hFGF21蛋白在SMD1168菌株中成功分泌表达.结论:成功克隆FGF21基因,并在Picha pastoris SMD1168中获得表达.