反义p73基因诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡

• 作者: 丁宁 兰云 王雅青 赵平 靳雪源
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 反义p73基因 逆转录病毒 肝癌细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 39-43
• 页数: 5页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文

摘要

目的:构建表达重组反义p73基因的重组逆转录病毒,观察其对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导活性,并进一步探讨其作用机制.方法:克隆p73基因的反义片段,重组法构成逆转录病毒载体pBabe-p73(pBP73),以脂质体Lipolfectamine2000将其转染293A细胞进行病毒包装;将逆转录病毒感染人肝癌细胞HepG2,用MTT法检测细胞生长抑制情况,Western blotting检测p73的表达;再分别用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡;最后检测p53,caspase-3和bcl-2蛋白的表达变化.结果重组质粒pBP73经鉴定连接正确,其转染293A细胞后上清液中可得到病毒,滴度达5×10~7pfu;MTT检测见pBP73病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组(45.1%vs.5.3%,69.5%vs.17.3%,均p<0.05).琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高峰,其凋亡百分率高达20.47%;p73蛋白高表达组p53和caspase-3蛋白的表达亦有显著升高(p<0.05),但bcl-2蛋白未见表达差异.结论:成功构建了p73逆转录病毒,反义p73基因在体外能够有效地诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,其可能机制是通过激活caspase-3而发生作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵平		26	186	7.0	13.0
2	靳雪源		12	43	4.0	5.0
3	丁宁		18	173	4.0	13.0
4	兰云		4	1	1.0	1.0
5	王雅青		2	0	0.0	0.0