shRNA干扰Bmi-1基因表达载体构建及其对膀胱癌5637细胞增殖抑制作用的研究

• 作者: 孙光 朱鸣阳 李成文 畅继武
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膀胱肿瘤 RNA干扰 5637细胞 表达载体 细胞增殖 细胞凋亡 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 835-838,846
• 分类号: R737.14
• 语种: 中文

摘要

目的:构建shRNA体内表达载体pGeneClipTM-shRNA,研究抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞凋亡的影响.方法:构建靶向Bmi-1的shRNA真核表达质粒pGeneClipTM-B1、pGeneClipTM-B2以及pGeneClipTM-B-neg(阴性对照质粒),采用脂质体转染试剂转染膀胱癌5637细胞,采用RT-PCR、蛋白质印迹法技术检测转染前后5637细胞中Bmi-1基因表达的变化;利用MTT法检测表达质粒对5637细胞增殖的影响;并利用流式法和蛋白质印迹法技术检测表达质粒对5637细胞凋亡的作用及影响机制.结果:经酶切、测序鉴定,重组质粒均在1200 bp左右出现酶切条带,符合设计要求.RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,5637细胞经小RNA干扰后Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,P＜0.05.与阴性对照组和未转染组相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞增殖明显受到抑制,P＜0.05.转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率分别为19.95%和27.27%,与未转染组7.23%和阴性对照组6.78%相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率明显增加,P＜0.05.结论:减少膀胱癌5637细胞Bmi-1基因的表达可抑制5637细胞增殖并促进细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙光	天津医科大学第二医院泌尿外科	132	711	12.0	21.0
2	畅继武	天津市泌尿外科研究所肿瘤免疫研究室	55	160	7.0	9.0
3	李成文	武警医学院附属医院泌尿外科	9	23	3.0	4.0
4	朱鸣阳	武警医学院附属医院泌尿外科	6	19	2.0	3.0