土壤镰刀菌种群检测的巢式PCR-DGGE方法的建立

• 作者: 孔令晓 朱杰华 栗秋生 王连生 程晓亮 纪莉景
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 土壤微生物 镰刀菌 PCR-DGGE 优化
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 89-93
• 分类号: S431.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1573.2010.04.019

摘要

本试验比较了4种提取小麦-玉米轮作免耕田土壤DNA的方法,并对巢式PCR反应体系和扩增条件进行了优化,建立了适合检测土壤中镰刀菌多样性的PCR-DGGE体系.结果表明:土壤DNA的质量是影响PCR扩增结果的关键因子,试剂盒Fast DNA SPIN for Soil 所提土壤DNA片段接近23 bp,A260 /A280比值为1.84,DNA产量为18.1 μg/g,更适合进行PCR反应.DNA模板的浓度决定PCR扩增结果,第一轮PCR扩增的DNA模板适宜量为2～5 ng,以第一轮PCR产物的原液为模板进行第二轮PCR扩增,在退火温度为67 ℃时扩增结果最好.PCR产物在变性范围为45%～60%的丙烯酰胺梯度凝胶中电泳7～8 h,其条带能够完全分离,可以用作土壤中镰刀菌多样性的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王连生	河北省农林科学院植物保护研究所	12	135	6.0	11.0
2	栗秋生	河北省农林科学院植物保护研究所	13	116	6.0	10.0
3	孔令晓	河北省农林科学院植物保护研究所	15	147	6.0	12.0
4	纪莉景	河北省农林科学院植物保护研究所	8	27	4.0	5.0
5	程晓亮	河北省农业大学植物保护学院	1	6	1.0	1.0
9	朱杰华	河北省农业大学植物保护学院	1	6	1.0	1.0