心肌乙酰胆碱敏感钾通道基因敲除小鼠模型的建立

• 作者: 刘中民 张良平 汤家铭 范慧敏 陈炳官
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 心衰 乙酰胆碱敏感性钾通道 基因打靶 胚胎干细胞 转基因小鼠 模式动物
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 35-39
• 页数: 5页
• 分类号: Q311+.8|Q593+.3
• 字数: 3517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn1008-0392.2010.01.008

摘要

目的 建立Kcnj5基因敲除小鼠模型,构建病理生理或药理实验平台,以确定钾通道和东莨菪碱等药物和心衰治疗的关系.方法 用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)载体构建了Kcnj 5打靶载体,电穿孔到129/S6/SvEv品系雄性小鼠的胚胎干细胞SCR012后,用300 μg/ml G418、2μmol/L GanC筛选克隆8 d.打靶后的干细胞显微注射到囊胚后,生育嵌合体再交配繁育杂合子及纯合子.用PCR方法结合片段克隆后基因测序鉴定基因型.免疫组化法证实基因型的表达.结果 挑取抗性克隆96个中正确同源克隆数20个,阳性率为20.8%.显微注射C57BL/6J囊胚180枚.14只受体出生12只小鼠中得到4只大于50%嵌合率雄鼠.配育获得29只 Kir3.4+/-F1代杂合子.现繁育F4后代获得Kir3.4-/-纯合子约百只.用单抗对敲除鼠心进行免疫组化鉴定,提示纯合子敲除鼠心为阴性.结论 用同源重组法敲除了干细胞靶基因,成功建立Kir 3.4-/-建立鼠系.成功建立Kir 3.4钾通道分子病动物模型.该基因的完全缺如模型有利于隔离了该基因的作用,对与之相关的基因的进一步阻断、拮抗或激活等药物研究,也是一个很好的模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤家铭	上海中医药大学实验动物中心	42	213	9.0	12.0
2	范慧敏	同济大学附属东方医院心血管病研究室	139	378	8.0	12.0
3	刘中民	同济大学附属东方医院心血管病研究室	156	455	9.0	13.0
4	陈炳官	同济大学附属东方医院中心实验室	12	56	5.0	7.0
5	张良平	同济大学附属东方医院心血管病研究室	2	6	2.0	2.0