pEGFP基因启动子区甲基化的梯度降落PCR定量检测法

• 作者: 张金良 杨怡姝 段小丽 江艳 王先良 王小利 王春晖 王菲菲 聂静
• 来源期刊: 环境与健康杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 亚硫酸氢钠测序法 甲基化 梯度降落PCR CMV启动子 pEGFP-C3
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 396-399
• 分类号: R994.6
• 语种: 中文

摘要

目的 改进亚硫酸氢钠测序法,并在CMV基因启动子甲基化检测中进行验证.方法 提取pEGFP-C3质粒重组人肝癌细胞株HepG2 DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后质粒基因CMV启动子序列设计特异引物并结合梯度降落PCR扩增,T-A载体克隆、测序,目标区域甲基化定量.结果 pEGFP-C3质粒基因约600 bp的CMV启动子区甲基化水平可以精确定量,检测结果与标准品一致,重复测量结果稳定.结论 改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测.