摘要:
目的 进一步研究七叶皂苷肾细胞毒性的氧化应激机制及谷胱甘肽(GSH)对七叶皂苷毒性的保护作用.方法 以人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)为模型,荧光探针法检测七叶皂苷钠(SA)0,10,15,20和25 μmol·L-1处理2 h后细胞内活性氧(ROS)含量变化;分别用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)1,5和10mmol·L-1,丁硫氨酸亚砜亚胺(BSO)0.5和2.5 mmol·L-1预处理HK-2细胞4 h,然后加入SA 20 μmol·L-1作用24 h,DTNB法测定预处理后及加入SA后细胞内GSH的含量;MTT法测定经NAC 5 mmol·L-1或BSO2.5 mmol·L-1预处理及未经预处理的HK-2细胞与SA 10,15,20,25,30和40 μmol·L-1作用24 h后的细胞存活率,并计算IC50值.结果 SA 15,20和25 μmol·L-1作用2 h后,HK-2细胞内ROS含量显著高于正常对照组(P<0.01).与正常对照组1×106个细胞内的GSH含量(5.1±1.2)nmol相比,BSO 2.5 mmol·L-1及NAC 10 mmol·L-1预处理后1 × 106个细胞内的GSH含量2.8±0.8和(2.7±2.3)nmol均显著降低(P<0.05),其他预处理组GSH含量无显著变化.除NAC 10 mmol·L-1外,各预处理组与SA 20 μmol·L-1作用24 h后GSH含量显著降低(P<0.01).与未经预处理的SA 20,25和30 μmol·L-1细胞存活率[(83±5)%,(69±5)%和(54±6)%]相比,经BSO 2.5 mmol·L-1预处理后,对应的细胞存活率显著降低,分别为[(69±6)%,(40±13)%和(25±15)%](P<0.05),NAC预处理对细胞存活率无显著影响;未经预处理及NAC和BSO预处理的SA的IC50分别为31.3±1.7,23.6±2.7和(34.2±1.5)μmol·L-1.结论 七叶皂苷通过氧化应激途径发挥肾细胞毒性,细胞内谷胱甘肽可对其氧化损伤起到保护作用.