根癌农杆菌介导的水稻纹枯病菌转化系统的建立

• 作者: 周而勋 李勇 李明海 杨媚 杨迎青 贺晓霞
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻纹枯病 立枯丝核菌 根癌农杆菌介导转化 T-DNA插入诱变 方法
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 617-622
• 分类号: Q933|S435.111.4+2
• 字数: 5619字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7216.2010.06.009

摘要

为建立水稻纹枯病菌的T-DNA插入诱变转化系统,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1 ⅠA)强致病力菌株GD118为转化的初始菌株,从预诱导时间、共培养时间、共培养时乙酰丁香酮的浓度、共培养温度和共培养时固体诱导培养基(SIM)的pH值等5个方面对转化条件进行了优化,成功地建立了适合于水稻纹枯病菌根癌农杆菌介导转化(ATMT)的优化系统.这个优化系统的转化条件如下:以30 μg/mL的潮霉素B作为转化子的筛选浓度,预诱导8 h,共培养20 h,共培养时固体诱导培养基上的乙酰丁香酮浓度为200 μmol/L,共培养温度25℃,共培养时固体诱导培养基pH 5.6～5.8.采用这个系统筛选到的转化子继代培养5代后,在含30 μg/mL潮霉素B的PDA平板上仍表现明显的抗性.从得到的转化子中随机抽取10个,利用根据抗潮霉素hph基因设计的特异性引物进行PCR扩增,转化子均能扩增出500 bp左右的预期条带;与此同时,以4个根癌农杆菌作为阳性对照,用根癌农杆菌Vir基因特异引物对转化子进行PCR扩增,以排除转化子受农杆菌污染所致的假阳性,结果表明:4个根癌农杆菌均能扩增出Vir基因条带(730 bp),而10个转化子均未能扩增出相应条带.以上两个PCR扩增的实验结果清楚地表明,T-DNA已经插入到目标菌株GD118中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨媚	华南农业大学植物病理学系	54	858	18.0	27.0
2	杨迎青	华南农业大学植物病理学系	8	166	7.0	8.0
3	李明海	华南农业大学植物病理学系	6	122	5.0	6.0
4	周而勋	华南农业大学植物病理学系	64	1164	19.0	31.0
5	李勇	华南农业大学植物病理学系	14	106	6.0	10.0
6	贺晓霞	华南农业大学植物病理学系	4	50	3.0	4.0