酶消化差速贴壁法分离培养老年ED大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的研究

• 作者: 刘保兴 刘涛 吴小军 崔万寿 张建 李维仁 王英博 袁亦铭 辛钟成
• 来源期刊: 中国男科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 勃起功能障碍 肌细胞,平滑肌 细胞培养 老年
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 3-8
• 分类号: R698.1
• 字数: 3463字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0848.2010.12.001

摘要

目的 探索培养老年勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(SMCs)生物学特性稳定、细胞纯度高、简单易行的一种新方法. 方法 电生理仪检测24月龄雄性大鼠阴茎海绵体压力和平均动脉压比值(ICP/MAP)来评价阴茎勃起功能,从而选择老年ED大鼠.分别采用组织块法、酶消化法和酶消化差速贴壁法分离培养24月龄ED大鼠SMCs;采用存活率、生长曲线、相差显微镜和HE染色等,比较不同方法培养SMCs的生物学特性;免疫组化、免疫荧光和流式细胞仪通过检测α-SM-actin、Myosin和Desmin的阳性率来鉴定SMCs,并比较不同方法培养SMCs的纯度. 结果 ICP/MAP低于0.45入选老年ED大鼠组.细胞存活率提示酶消化法和组织块法存活率分别为93%和90%,酶消化差速贴壁法显著增加到99%(P＜0.05);生长曲线提示酶消化差速贴壁法细胞数量在第5～7天也显著增加(P＜0.05);酶消化差速贴壁法培养细胞在相差显微镜和HE染色下形态基本一致,呈梭形生长.免疫组化、免疫荧光和流式鉴定是SMCs,组织块法和酶消化法原代培养的SMCs纯度平均分别为45%和82%,酶消化差速贴壁法SMCs纯度显著增加到98%(P＜0.05).α-SM-actin、Myosin和Desmin在SMCs中有大量表达,在11代以内SMCs纯度维持较高水平(95%以上). 结论 酶消化差速贴壁法快速简便,可在一定范围内提高SMCs纯度;用此法培养的SMCs,生物学特性稳定,细胞纯度高,为建立SMCs细胞株奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张建	北京大学第一医院男科中心	201	1295	18.0	28.0
3	袁亦铭	北京大学第一医院男科中心	42	417	11.0	20.0
4	刘涛	北京大学第一医院男科中心	84	842	16.0	27.0
7	刘保兴	北京大学第一医院男科中心	13	59	5.0	7.0
8	王英博	北京大学口腔医院第三门诊部	3	13	2.0	3.0
9	崔万寿	北京大学第一医院男科中心	12	117	5.0	10.0
10	吴小军	北京大学第一医院男科中心	4	4	1.0	2.0
11	李维仁	北京大学第一医院男科中心	6	72	4.0	6.0