百合斑驳病毒CP与Cl基因的融合表达、多抗制备及其应用

• 作者: 安丽萍 张玉宝 王亚军 童勋章 谢忠奎 郭志鸿 郭芳
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 百合斑驳病毒 外壳蛋白 细胞质内含体 抗体 DAS-ELISA 病毒检测
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 475-481
• 分类号: S432.4
• 字数: 4417字
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR方法从甘肃地区引种的切花百合上克隆了百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因与细胞质内含体(cytoplasmic inclusions,Cl)基因的3'端600 bp片段,连接到原核表达载体pET-28a(+)上.构建了融合表达的重组质粒pET-28a-CP-CL200.重组质粒转化大肠杆菌BL21成功表达了融合蛋白CP-C1200.经镍柱亲和层析获得纯化的融合蛋白,进一步用其免疫家兔制备了多克隆抗体.Western Blot结果显示,该多抗与感染LMoV的百合叶片中的病毒CP与CI均发生特异性反应,而对健康百合叶片无反应.用该多抗建立双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测百合叶片样品,相对于RT-PCR方法其灵敏度和特异性均达到了93.3%.研究结果为快速、准确检测百合斑驳病毒的试剂盒研制奠定了基础.