三角褐指藻PPDK基因RNAi载体的构建和基因枪转化

• 作者: 王娟飞 陈军 陈志森
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 三角褐指藻 微粒轰击 RNAi C4途径 丙酮酸磷酸二激酶
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 400-405
• 分类号: Q812
• 字数: 5214字
• 语种: 中文

摘要

三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的全基因组序列已经公布,为了把RNAi的技术应用于三角褐指藻的相关研究中,以C4途径关键酶丙酮酸磷酸二激酶基因(PPDK)为试验对象,构建了用于表达与PPDK部分序列同源的发夹RNA(hpRNA)的载体pPPDKi,并用基因枪方法成功将PPDKi和Zeocin抗性基因sh ble共转化到三角褐指藻细胞中.摸索出的较优基因枪转化的条件为:使用50%海水f/2培养基预培养的藻进行微粒轰击,轰击压力10.5 MPa,钨粉直径1.0 μm,轰击距离6.5 cm.PCR 检测结果表明,在Zeocin筛选的阳性藻株中约有60%同时整合了PPDKi序列.将其中6株共转化的转基因藻与野生型藻的生长速率进行比较,发现它们的生长受到4.6%～10.7%的抑制.这可能是PPDKi的表达影响了丙酮酸磷酸二激酶(PPDK)的活性,从而进一步影响了三角褐指藻的生长,但也有可能是外源片段的插入影响了其他基因的正常表达,导致细胞活动异常.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈军	厦门大学海洋与环境学院	14	51	4.0	6.0
2	王娟飞	厦门大学海洋与环境学院	1	12	1.0	1.0
3	陈志森	厦门大学海洋与环境学院	3	17	2.0	3.0