大豆RACK1基因RNAi载体构建及植株转化

• 作者: 刘喜平 李大红 甄萍萍
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 大豆 RACK1 RNAi 载体构建 Southern blot RT-qPCR
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 944-949
• 页数: 6页
• 分类号: S565.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.6.944

摘要

[目的]筛选大豆RACK1基因的RNAi突变体,为研究RACK1基因在大豆生长发育过程的调控作用提供依据.[方法]采用RT-PCR克隆大豆叶片RACK1基因核心保守序列片段,以植物表达载体pCAMBIA 1301为基本载体,构建抑制大豆RACK基因表达的RNAi载体.通过农杆菌介导转入大豆子叶节,经潮霉素筛选转基因植株,利用PCR、Southern blot及RT-qPCR进行转基因植株检测.[结果]克隆获得大豆RACK1基因核心保守序列片段432 bp;将该基因片段连接到pCAMBIA1301表达载体内含子两侧,通过酶切分析,RNAi载体构建正确.通过农杆菌介导,将该载体转入大豆中黄13号,获得23个转基因大豆株系;经PCR和Southern blot检测,确定大豆RACK1基因RNAi片段已融合到大豆基因组中.经定量RT-qPCR分析,不同转基因大豆株系RACK1基因mRNA的表达量具有明显差异,其在株系5的表达量最高,为对照的68.5％;株系7最低,降至对照的19.9％.[结论]成功构建了大豆RACK1 RNAi表达载体并导入大豆基因组中,获得23个农杆菌介导的RACK1 RNA干扰表达的大豆转基因植株,为研究RACK1基因在大豆生长发育过程中的功能和作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘喜平	黄淮学院生物工程系	19	156	7.0	11.0
2	李大红	黄淮学院生物工程系	32	121	6.0	9.0