克隆测序方法检测三核苷酸重复次数的可靠性

• 作者: 吴志英 王柠 甘世锐 郑巧娟
• 来源期刊: 中华神经科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脊髓小脑共济失调 三核苷酸重复 神经组织蛋白质类 核蛋白质类 克隆,分子 可重复性,结果
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 659-663
• 分类号: R4
• 字数: 2902字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-7876.2010.09.016

摘要

目的 探讨克隆测序技术用于检测三核苷酸(CAG)重复次数的可靠性.方法 对1例临床确诊的遗传性脊髓小脑性共济失调1型(SCA1)患者,PCR法扩增ATXN1基因的CAG重复次数,8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(DPAGE)分离PCR产物以协助确诊.2.5%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物的大小片段,割胶回收大小片段测序.另外将割胶回收的大片段进行TA克隆测序.结果 DPAGE提示大片段存在CAG的异常扩增,故该患者可确诊为SCA1.PCR产物大小片段直接测序结果为:小片段为26次CAG重复,大片段为47次重复.而将大片段克隆测序后,则有50、47、46、41、32、28、27、26、25及24次共10种不同的CAG重复次数,而且出现了CCG、CGG、CTG、CAA、TAT等序列变异现象.结论 克隆测序检测CAG重复次数会造成重复次数变异,且存在各种碱基变异.因此不宜单用TA克隆测序检测CAG重复次数及筛查碱基变异,需联合应用多种方法以提高结果的可靠性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王柠	福建医科大学附属第一医院神经内科	101	519	11.0	18.0
2	吴志英	复旦大学附属华山医院神经内科	31	141	8.0	9.0
3	郑巧娟	福建医科大学附属第一医院神经内科	4	21	3.0	4.0
4	甘世锐	福建医科大学附属第一医院神经内科	6	20	3.0	4.0