肺炎链球菌假想蛋白SPD0414的表达纯化及保守性分析

• 作者: 何於娟 崔亚利 张雪梅 牛司强 王虹 胥文春 龚艺
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎链球菌 SPD0414假想蛋白 表达纯化 多克隆抗体 保守性
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 824-827
• 分类号: R392.1
• 字数: 3758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.09.014

摘要

目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性.方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化重组蛋白.用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白特异性及纯度.通过纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备其多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在6种常见肺炎链球菌分离株的保守性.结果:克隆的SPD0414序列与Gene Bank中的数据相符,并实现了重组SPD0414蛋白高水平的可溶表达纯化蛋白免疫BALB/c小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western blot验证SPD0414蛋白在6株常见肺炎链球菌菌株中均有表达.结论:成功制备了高滴度、高特异性的SPD0414多克隆抗体,证实了SPD0414在肺炎链球菌不同菌株间保守性较高,为肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础.