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牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析
牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析
作者:
仲跻峰
何洪彬
刘顺德
李秋玲
杨宏军
杨少华
王长法
高小艳
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
牛气管抗菌肽
表达
抗菌活性
组织分布
乳腺炎
摘要:
本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料.作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP基因,分析其序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性,人工合成牛TAP基因,构建pET32a(+)-TAP重组质粒;然后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并纯化.对表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot鉴定;在线软件分析目的蛋白表达量.采用滤纸片法测定重组牛TAP的体外抗菌活性,并用RT-PCR法分析牛各组织中TAP表达情况.测序结果表明,扩增到114 bp目的基因片段,可编码含38个氨基酸残基的成熟蛋白.SDS-PAGE分析表达的融合蛋白相对分子质量为24 ku,重组蛋白以可溶性方式存在,表达量占菌体总蛋白的52.1%.Western Blot检测只出现单一条带.抗菌效价分析表明0.115 μg·μL-1重组蛋白对牛源金黄色葡萄球菌有一定的抗菌活性.TAP基因在奶牛咽喉、肺、气管、小肠、肝、心脏及口腔黏膜中均有表达,在鼻黏膜和舌黏膜中微量表达,在皮肤中几乎不表达.作者成功表达了牛TAP基因,重组牛TAP蛋白在大肠杆菌中实现高效表达,并具有一定的抗奶牛乳腺炎致病菌的活性,为未来培育抗乳腺炎转基因奶牛及相关基因工程产品的开发奠定了基础.
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文献信息
篇名
牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析
来源期刊
畜牧兽医学报
学科
农学
关键词
牛气管抗菌肽
表达
抗菌活性
组织分布
乳腺炎
年,卷(期)
2010,(9)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
1166-1171
页数
分类号
S852.4
字数
4720字
语种
中文
DOI
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研究主题发展历程
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牛气管抗菌肽
表达
抗菌活性
组织分布
乳腺炎
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
畜牧兽医学报
主办单位:
中国畜牧兽医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0366-6964
CN:
11-1985/S
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区圆明园西路2号
邮发代号:
82-453
创刊时间:
1956
语种:
chi
出版文献量(篇)
5501
总下载数(次)
6
总被引数(次)
62883
相关基金
山东省自然科学基金
英文译名:
Natural Science Foundation of Shandong Province
官方网址:
http://kyc.wfu.edu.cn/second/wnfw/shandongshengzirankexuejijin.htm
项目类型:
重点项目
学科类型:
期刊文献
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畜牧兽医学报2010年第5期
畜牧兽医学报2010年第4期
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畜牧兽医学报2010年第11期
畜牧兽医学报2010年第10期
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