双重PCR快速鉴别无乳链球菌和海豚链球菌

• 作者: 卢迈新 叶星 江小燕 田园园 邓国成 黎坚平 黎炯
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 双重PCR 无乳链球菌 海豚链球菌 cfb基因 16S rRNA
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 449-452
• 分类号: S941.4
• 字数: 3067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1238.2010.00449

摘要

根据无乳链球菌的cfb基因和海豚链球菌16S rRNA基因序列,设计、合成2对引物,优化扩增条件,建立了快速鉴别无乳链球菌和海豚链球菌的双重PCR方法.用该方法扩增无乳链球菌和海豚链球菌,可分别获得474、296 bp的特异性片段,扩增嗜水气单胞菌、铜绿假单胞菌等其他常见鱼病原菌无特异性片段.该方法可实现对无乳链球菌和海豚链球菌的快速鉴别,具较高的灵敏度,可检测到基因组含量分别为3.2×10-3 ng/μL的无乳链球菌和3.0×10-2 ng/μL的海豚链球菌.对采集自广东与海南两省养殖罗非鱼病鱼的11份病原样品进行检测,均可获得474 bp片段,测序与BLAST分析结果表明,扩增到的序列均为无乳链球菌cfb基因序列,可从分子水平上确定这些样品为无乳链球菌,与生化鉴定结果一致.