HRB2基因对细胞增值影响的研究

• 作者: 李建民 毕焕京 顾卫娟
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: HRB2 RNA干扰 慢病毒 细胞增值
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1613-1617
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:研究HRB2基因对细胞增值的影响.方法:设计4对HRB2 RNA寡核苷酸片段,经退火制备的双链DNA oligo,连接经双酶切的线性化PLKO.1-TRC-SP6载体上,转化后经PCR鉴定,阳性克隆测序,质粒抽提,应用Lipofectamine2000将质粒导入293T细胞,包装成慢病毒,再感染靶细胞293T,用嘌呤霉素筛选15天后,收集细胞抽提RNA,实时定量RT-PCR检测HRB2mRNA水平,评价干扰效果.Western免疫印迹进一步确认有效作用靶点.通过划痕愈合实验和绘制生长曲线研究HRB2基因对细胞增值的影响.结果:载体构建成功.包装成慢病毒感染293T细胞系,发现:2号和4号靶点敲减HRB2基因效率达84%和88%.差别有统计学意义.通过western进一步证实了2号和4号是抑制HRB2的有效作用靶点.划痕愈合实验和绘制生长曲线的结果显示2号和4号靶点细胞株细胞生长受到抑制,并且4号较2号稍明显.结论:成功构建并筛选了携带有人HRB2基因的shRNA慢病毒载体及有效靶点,研究发现HRB2基因对细胞增值产生了影响,这为进一步研究HRB2的生物学功能提供了实验平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李建民	南京医科大学基础医学院	30	187	4.0	13.0
2	顾卫娟	南京医科大学基础医学院	2	0	0.0	0.0
3	毕焕京	南京医科大学基础医学院	1	0	0.0	0.0