本研究旨在探讨不同的联合激活处理、精子预处理方法和单精子注射方式对奶牛分离精子ICSI效率的影响.借助显微操作仪将经不同预处理的奶牛分离X精子直接注入体外成熟22~24 h的牛卵母细胞胞质内,注射过程采用回吸胞质和不回吸胞质2种处理,最后分别用3种激活方案对注射卵进行激活.结果表明:用CRlaa+Ionomycin+6-DMAP对ICSI注射卵进行激活后,卵裂率和囊胚率都高于A23187+CHX和7%ET+CHX两种联合激活组(63.74% vs 61.09%、53.75%;28.54% vs 17.68%、22.00%,P<0.05);采用percoll密度梯度离心法处理精子,卵裂率(77.10% vs 62.19%,P<0.05)与囊胚率(26.95% vs 22.82%,P>0.05)均高于上游法处理组;ICSI时回吸胞质获得的注射卵,其卵裂率和囊胚率均显著高于不回吸胞质处理组(63.10%,25.35% vs41.56%,19.40%,P<0.05).结果表明,用percoll密度梯度离心法处理精子、注射时回吸胞质、用CRlaa+Iono-mycin+6-DMAP激活ICSI注射卵,可显著提高奶牛分离精子ICSI的效率.