网状内皮组织增生病病毒反向遗传操作系统的建立

• 作者: 王永强 王笑梅 祁小乐 秦立廷 邓小芸 高宏雷 高玉龙 高立
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 网状内皮组织增生病 感染性分子克隆 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 659-663
• 分类号: S852.65
• 字数: 3372字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2010.09.01

摘要

为建立网状内皮组织增生病痛毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HIJR0901的全基因组克隆于pBluescript Ⅱ载体中,并在基因组中通过改变核苷酸(C2250G)消除了其中的Msc Ⅰ酶切位点作为分子标签,构建了REV感染性分子克隆pBlu-mHLJR0901.测序结果表明,REV HLJR0901株前病毒DNA全长为8284 bp.将pBlu-mHLJR0901转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,间接免疫荧光、PCR、测序及电镜观察表明拯救出REV.其拯救的REV在CEF细胞上具有与亲本毒相似的复制特性.该反向遗传操作系统的建立为REV的深入研究提供了有效的技术操作平台.