光皮桦SSR分子标记体系的建立

• 作者: 尤卫艳 朱玉球 程龙军 童再康 黄华宏
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 林木育种学 光皮桦 简单重复序列(SSR)分子标记
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 464-469
• 分类号: S722
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0756.2010.03.023

摘要

采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-硅珠法提取光皮桦Betula luminifera嫩叶DNA,利用近缘种日本白桦B.platyphylla var.japonica和欧洲白桦B.pendula的引物,建立先皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系.在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析.结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量、Mg2+浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500 mmol·L-1,1.0×16.67 nkat时结果最好;引物退火温度比日本白桦扩增时提高1℃时效果佳.PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后随机挑取其中3对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,对引物的通用性做进一步检验,序列经比对后得到的与原物种序列相似度(max ident值)均在95.0%以上.可见,近缘种日本白桦和欧洲白桦的SSR引物可以在光皮桦上应用.