光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化

• 作者: 姜小凤 童再康 陈争
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 林木育种学 光皮桦 EST-SSR PCR反应体系 正交设计
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 960-965
• 页数: 6页
• 分类号: S792.15|Q78
• 语种: 中文

摘要

为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平.优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg·L-1DNA模板,0.500 μmol·L-1引物,1.250 mmol· L-1 Mg2+,0.250mmol· L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat·L-1rTaq酶.通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度.对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带.