基于CGE技术的甘蔗SSR-PCR反应体系优化

• 作者: 刘丽敏 李杨瑞 桂意云 汪淼 秦翠鲜 陈忠良 黄东亮
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 甘蔗 SSR分子标记 毛细管凝胶电泳(CGE) 反应体系 遗传分析
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种?种质资源?分子生物学
• 页码范围: 1463-1469
• 页数: 7页
• 分类号: S566.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/jissn.2095-1191.2016.09.1463

摘要

【目的】优化基于毛细管凝胶电泳（CGE）技术的甘蔗SSR-PCR反应体系，为甘蔗遗传多样性和亲缘关系研究、分子辅助育种及遗传图谱构建提供技术支持。【方法】基于CGE技术，采用正交试验设计，选择dNTPs浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和DNA模板量为考察因素进行优化，确定最佳SSR-PCR反应体系，并用于8个甘蔗种质资源材料的遗传多样性分析。【结果】最佳SSR-PCR反应体系（20μL）：dNTPs浓度0.15 mmol/L，DNA聚合酶1.5 U，引物浓度0.50μmol/L，DNA模板量25 ng。利用该体系对8份来自不同国家地域的甘蔗种质材料进行遗传多样性分析，发现8对SSR引物共扩增出101个片段，其中多态性片段为93个，多态性比率为92.1%。聚类分析结果表明，参试材料间的遗传相似性系数为0.521~0.871，在相似性系数为0.614处，所有参试材料可分为两大类，3份国外种质材料PINDAR、CP72-1210、CP84-1198与ROC20、GT69-156聚为一类；而ROC26、GT02-237和GT97-69聚为另一类。【结论】基于CGE技术的SSR-PCR反应体系检测结果稳定，重复性好，适用于甘蔗的遗传分析及遗传作图。