抗H5N1亚型高致病性禽流感猴源噬菌体scFv的构建和表达

• 作者: 邓国华 陈化兰 陈樱
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猴源scFv 重叠延伸PCR 噬菌体抗体库 间接免疫荧光
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 249-253
• 分类号: S852.65
• 字数: 4336字
• 语种: 中文

摘要

为探索治疗禽流感的方法,本实验从免疫H5N1亚型禽流感疫苗的猕猴淋巴细胞中提取总mRNA并扩增重链和轻链可变区(VH、Vλ和Vκ),用重叠延伸PCR方法构建VH-Linker-Vλ和VH-Linker-Vκ形式的单链抗体(scFv),采用噬菌体展示技术构建了噬菌体抗体库,从2.2×106的噬菌体库中淘选得到具有较高亲和力的H6株scFv,并通过ELISA、SDS-PAGE、western blot、间接免疫荧光(IFA)和竞争抑制ELISA对其进行鉴定,证实所获得的scFv为32 ku,并且能与病毒发生特异性结合.IgBlast序列分析发现,所得到的scFv基因Vλ与人免疫球蛋白胚系基因同源性达91.5%,而VH同源性为75%.本研究所得到的猴源抗体可变区为人源化抗体的构建以及禽流感的治疗奠定了基础.