小鼠主要组织相容性复合物基因各位点的提取和质粒的构建

• 作者: 侯生才 傅毅立 张文谦 李彤 李辉 游宾 王洋 胡滨 苗劲柏 陈奇瑞
• 来源期刊: 中华器官移植杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 主要组织相容性复合物 移植 基因
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 626-629
• 分类号: R6
• 字数: 3693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1785.2010.10.014

摘要

目的 提取小鼠的主要组织相容性复合物(MHC)基因各个位点,构建质粒,以用于转基因实验.方法 提取小鼠RNA,逆转录cDNA,以嵌套聚合酶链反应(PCR)的方法扩增,将产物与T载体连接、克隆和测序;用内切酶切下,再与表达型载体连接,再次测序挑选克隆.结果 嵌套PCR后,产物通过测序证实为目的 基因序列,与T载体、表达型载体的连接和克隆后,经测序证实并挑选得到了正确的克隆.结论 MHC各位点基因可以通过嵌套PCR扩增获得;构建的表达型载体质粒可用于今后转入受者的实验.