成纤维细胞生长因子-21[Arg59]突变体基因的克隆及融合蛋白的表达与纯化

• 作者: 万晓珊 张海淼 张耀方 李校堃 王会岩 赵宏鑫 邵明龙
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 成纤维细胞生长因子-21 突变体 SUMO融合表达 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 491-495
• 分类号: Q813
• 语种: 中文

摘要

目的:对野生型成纤维细胞生长因子-21(FGF21)进行突变改造及表达与纯化,为后续蛋白质体外偶联(Pull-down)实验及建立人源肝癌裸鼠模型奠定基础.方法:采用PCR定点突变方法,将FGF21 cDNA第59位赖氨酸密码子突变为精氨酸密码子,所得的突变体片段与SUMO分子伴侣相连后插入表达载体pET20b,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.对表达产物进行Ni-NTA柱亲和层析、酶切和除盐等纯化分析.结果:PCR扩增出约546 bp的特异性片段,测序分析表明已成功引入突变;所构建的pET20b-SUMO-FGF21[Arg59] 重组阳性克隆经PCR与双酶切鉴定及测序分析,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约31 500,且为可溶性;Western blotting分析证实:纯化后产物是成熟的FGF21[Arg59] 突变体蛋白.结论:成功构建FGF21[Arg59] 突变体基因,并经表达纯化得到成熟的FGF21[Arg59] 突变体蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵明龙	吉林农业大学生命科学学院	3	23	2.0	3.0
2	王会岩	吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心	12	61	5.0	7.0
4	张耀方	吉林农业大学生命科学学院	3	21	2.0	3.0
5	万晓珊	吉林农业大学生命科学学院	2	15	2.0	2.0
6	赵宏鑫	吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心	1	2	1.0	1.0
7	张海淼	吉林农业大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0