白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质的制备及鉴定

• 作者: 史利宁 孔小祥 曹王丽 李芳秋 王仕钦
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白念珠菌 烯醇化酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 353-355
• 页数: 3页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文

摘要

目的 制备具有高免疫原性的白念珠菌重组烯醇化酶蛋白质.方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA作为模板,用PCR法扩增烯醇化酶的全长DNA序列,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组融合蛋白质表达.用抗his标签的单克隆抗体和白念珠菌抗体阳性的病人血清进行western blot鉴定,亲和层析柱纯化重组蛋白质.结果 获得了含白念珠菌烯醇化酶全长基因的重组表达载体和相应工程菌株,经IPTG诱导后能高效表达重组融合蛋白质.经已含抗体的病人血清进行western blot鉴定,表明诱导的重组蛋白质有良好的免疫原性.结论 成功克隆了白念珠菌烯醇化酶全长基因并在大肠埃希菌中获得高效表达;重组蛋白质具有良好的免疫原性.