ccr重组酶基因介导SCCmec基因岛的剪切功能研究

• 作者: 孙丹丹 罗恩杰 马笑雪 黄惠颖
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 SCCmec基因岛 ccrC基因 重组酶 质粒
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 161-164
• 分类号: R378.1
• 字数: 3152字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带ccrC和ccrAB重组酶基因的载体质粒,并导入耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中,验证ccrC重组酶具有把Ⅴ型SCCmec基因岛从细菌染色体上特异性剪切下来的功能.方法 以携带Ⅴ型SCCmee基因岛的菌株81/0342的染色体DNA为模板,应用PCR法扩增ccrC基因,再以携带Ⅱ型SCCmec基因岛的菌株N315的染色体DNA为模板,应用PCR法扩增ccrAB基因,分别克隆到温度敏感质粒pYT3上构建重组质粒pSRSC和pSR2AB,电穿孔技术交又导入原野生菌株81/0342和N315中构建6株细菌转化株,在适宜温度培育下充分表达质粒,应用PCR法检测SCCmec基因岛从染色体上脱落,并连续10 d传代培养细菌,应用影印实验检查细菌的药物敏感性变化.结果 ccrC重组酶基因的PCR扩增产物为1.9 kb,小于Ⅱ型SCCmec基因岛上携带的ccrAB重组酶基因.经鉴定证实成功构建了重组质粒pSR5C和pSR2AB,当菌株81/0342中导入重组质粒pSR5C和pSR2AB后,81/0342所携带的Ⅴ型SCCmec基因岛能从染色体上剪切下来,并以环状DNA结构存在于细菌中,而只有当N315中导入重组质粒pSR2AB时,N315所携带的Ⅱ型SCCmec基因岛才能脱落下来,SCCmec基因岛脱落的细菌成为对妥布霉素和头孢唑肟药物敏感的菌株.结论 ccrC重组酶与ccrAB一样具有特异性剪切酶的功能,可单独介导Ⅴ型SCCmec基因岛的脱落,从而为社区MRSA所携带的Ⅴ型SCCmec基因岛在金黄色葡萄球菌之间的广泛传播提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗恩杰	中国医科大学基础医学院病原生物学教研室	76	405	11.0	17.0
2	孙丹丹	中国医科大学基础医学院病原生物学教研室	43	252	8.0	14.0
3	马笑雪	中国医科大学基础医学院病原生物学教研室	12	56	4.0	7.0
4	黄惠颖	中国医科大学基础医学院病原生物学教研室	1	3	1.0	1.0