中内毒素(LPS)诱导后家蝇幼虫抗菌肽Cec Md基因的克隆、生物信息学分析及其表达载体的构建

• 作者: 姜宁 张爱忠 赵平森
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 家蝇 CecMd 基因克隆 重组表达载体 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 74-81
• 页数: 8页
• 分类号: Q78|S852.74
• 语种: 中文

摘要

从脂多糖(LPS)诱导或非诱导的家蝇幼虫体内抽提总RNA,根据家蝇Ceeropin基因(GenBank:DQ 232774)设计特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出编码Cec Md开放阅读框(ORF)的cDNA序列,将其克隆入pMD18-T载体,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将Cec Md亚克隆基因与线性化的pET32a(+)连接,构建重组表达载体pET32a(+)/Cec Md,并对此基因及其推导氨基酸序列进行系统的生物信息学分析.结果表明从脂多糖(LPS)诱导的家蝇幼虫体内成功的扩增出家蝇抗菌肽Cecropin基因,命名为Cec Md,但是从未诱导的虫体内未能获得此基因;Cec Md开放阅读框的cDNA全长为192 bp,编码由63个氨基酸残基组成的多肽;此多肽最可能的裂解位点在氨基酸残基A23和G24之间,提示1～23氨基酸残基组成信号肽,24～63氨基酸残基构成成熟肽;Cec Md的全长肽包含4个螺旋,成熟肽(不包括信号肽)含有2个螺旋,两者均不舍二硫键;Cec Md与果蝇Cecropins的同源性显著高于其他昆虫,达到81.0%以上;经PCR,限制酶切和DNA测序鉴定表明,成功构建了重组表达载体pET32a(+)/Cec Md.重组表达载体pET32a(+)/Cec Md的构建及其Cec Md基因的生物信息学分析对其生物学功能研究和高效表达工程菌的构建具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张爱忠	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	181	1011	16.0	23.0
2	姜宁	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	152	965	17.0	24.0
3	赵平森	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	3	4	1.0	2.0