人前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 于继云 任杰 江乐 阎瑾琦 高江平
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PSCA蛋白,人 质粒 重组融合蛋白质类
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 986-988
• 分类号: R737.25
• 语种: 中文

摘要

目的 构建包含人前列腺干细胞抗原(PSCA)的原核表达质粒,并进行诱导表达、蛋白纯化及鉴定.方法 通过PCR扩增人PSCA基因片段,与过渡载体pGEM-T Easy连接后进行测序鉴定,鉴定正确后,将PSCA基因片段酶切并插入含有谷胱甘肽s-转移本科GST标签的原核表达载体pET42a,得到重组质粒pET42a-PSCA.将pET42a-PSCA转化大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达GST-PSCA融合蛋白,用Glutathione-Sepharose 4B柱对融合蛋白进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 PSCA基因的PCR产物大小与预期相符,测序结果与GenBank 中的PSCA序列一致.pET42a-PSCA原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE及Western blotting检测显示融合蛋白诱导表达成功,分子量大小约为43kD.结论 成功构建了人PSCA的原核表达质粒,能在BL21菌株中表达,且纯化后得到较高纯度的GST-PSCA融合蛋白,为后续抗前列腺癌基因疫苗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高江平	解放军总医院泌尿外科	130	819	13.0	22.0
2	阎瑾琦	军事医学科学院基础医学研究所	25	54	4.0	5.0
3	于继云	军事医学科学院基础医学研究所	59	145	6.0	9.0
4	任杰	军事医学科学院基础医学研究所	4	24	2.0	4.0
5	江乐	曲阜师范大学生命科学学院	4	9	2.0	2.0