重组人酸性成纤维细胞生长因子-穿膜肽融合蛋白的克隆表达、纯化及活性检测

• 作者: 张睿 李婷婷 李校堃 焦悦 王怡 王晓杰 田海山 高丽昌
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 酸性成纤维细胞生长因子 穿膜肽 表达 纯化 活性检测
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 882-886
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:高效表达并纯化具有生物学活性的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF) -穿膜肽(tat)融合蛋白,为进一步开发基因工程药物提供实验依据.方法:通过双酶切方法,从质粒pMD18-T-aFGF-tat中获得aFGF-tat基因片段,并将aFGF-tat融合基因与原核表达载体pET3c连接后转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化,MTT法检测aFGF-tat融合蛋白对NIH 3T3细胞的促增殖作用.结果:经酶切和基因测序证实获得的重组人aFGF-tat基因序列与GenBank报道的完全一致,构建的pET3c-aFGF-tat表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达aFGF-tat融合蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量与理论预期值相符,经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后蛋白纯度高于95%,Western blotting分析表达产物与人aFGF多克隆抗体具有特异结合能力,并能够促进NIH 3T3细胞增殖.结论:成功表达重组人aFGF-tat融合蛋白工程菌,获得aFGF-tat纯蛋白,并证实aFGF-tat融合蛋白具有促细胞增殖活性.