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摘要:
目的 建立分子信标荧光定量PCR检测结核分枝杆菌的最佳反应体系,探讨影响分子信标荧光定量PCR扩增结果的多个因素.方法 利用单因素法和正交实验法,从MgCl2,引物,分子信标探针,dNTP,Taq DNA聚合酶5种因素对分子信标荧光定量PCR反应体系进行优化,并对这两种方法所得的最优体系进行比较.结果 单因素法得到的最优反应体系(25 μl)为:4 mmol/L MgCl2,上、下游引物各0.3 μmol/L,分子信标探针0.1 μmol/L,200 μmol/L dNTP,2U Taq DNA;正交法得到的最优反应体系(25 μl)为:6 mmol/L MgCl2,上、下游引物各0.2 μmol/L,分子信标探针0.1 μmol/L,100 μmol/L dNTP,3U Taq DNA聚合酶,正交法得到的最优反应体系的荧光定量PCR扩增曲线形状更好,Ct值较小,△Rn较大.结论 采用正交法得到的荧光定量PCR反应体系优于单因素法,进行实时荧光定量PCR反应体系优化时,正交实验设计是一条科学、可靠、高效、快捷的途径.
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文献信息
篇名 分子信标荧光定量PCR检测结核分枝杆菌的反应体系优化方法对比研究
来源期刊 现代检验医学杂志 学科 医学
关键词 结核分枝杆菌 分子信标荧光定量PCR 单因素法 正交法
年,卷(期) 2010,(3) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 27-30
页数 分类号 R378.911|Q503
字数 3598字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.03.009
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结核分枝杆菌
分子信标荧光定量PCR
单因素法
正交法
研究起点
研究来源
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
现代检验医学杂志
双月刊
1671-7414
61-1398/R
大16开
西安市友谊西路256号陕西省人民医院内
52-116
1986
chi
出版文献量(篇)
6791
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21095
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