分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用

• 作者: 方梅 洪志强 陆巧荣
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 分子信标 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 162-165
• 页数: 4页
• 分类号: R372
• 字数: 3543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2010.01.037

摘要

目的 建立结核分枝杆菌的分子信标荧光定量PCR检测方法 ,探讨该方法 检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 针对结核分枝杆菌Ag85B DNA特异保守序列设计引物和分子信标探针,并构建标准品.采用分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法检测158例肺结核患者痰液标本,比较3种方法 的检出率.结果 所建立方法 最低检测限度为2个基因拷贝/反应,在2×10~2～2×10~8基因拷贝/mL范围内,Ct值同DNA量的对数呈线性关系.该方法 检测5株非分枝杆菌和6株非结核分枝杆菌结果 均为阴性,检测结核分枝杆菌H37Rv出现75 bp特异条带.分子信标荧光定量PCR法、抗酸染色法、集菌培养法阳性检出率分别为60.13%、16.46%、31.01%,荧光定量PCR法检出率明显高于抗酸染色法和集菌培养法.结论 分子信标荧光定量PCR法具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的诊断有一定的临床意义.