抗菌肽CM与血管内皮生长因子VEGF_(121)在大肠杆菌中表达及鉴定

• 作者: 刘孝菊 刘敏 尹海燕 尹翌秋 李校堃 王会岩 秦玉侠 赵宏鑫
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗菌肽CM 血管内皮生长因子 融合蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 285-290
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建和表达人VEGF_(121)的基因工程菌,为肿瘤血管的靶向治疗提供实验数据.方法:通过PCR引物延伸的方法,获得SUMO-CM-VEGF_(121)融合基因;将该融合基因与原核表达载体pET22b连接后转化至Rosetta-gami(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达.将融合蛋白经DEAE阴离子交换层析、Ni-NTA和分子筛等方法进行纯化,用SUMO酶切除分子伴侣SUMO后,最终获得融合蛋白CM-VEGF_(121).结果:DNA测序,设计合成的SUMO-CM-VEGF_(121)融合基因为774 bp;所构建的表达菌株Rosetta-gami (DE3)/pET22b-SUMO-CM-VEGF_(121)在20℃诱导24 h可溶性最好,其可溶性表达为菌体可溶性蛋白的21%.Western blotting检测该表达产物与人VEGF单克隆抗体具有特异性结合能力.结论:原核表达载体pET22b和Rosetta-gami宿主菌为CM-VEGF_(121)最合适的条件,解决了其表达量低和不可溶问题.